2020年版《中国药典》和“ICH Q5A”对于生物制品的病毒安全性有着明确要求，由人的、动物的组织或者体液提取的制品、动物源性单克隆抗体及真核细胞表达的重组制品，下游生产工艺中必须包含稳健的病毒清除步骤。最常用的病毒清除工艺包括病毒灭活和病毒过滤。对病毒清除工艺进行验证时，要求必须验证至少两种机理不同的病毒清除技术，例如吸附、灭活、分子排阻等，至少验证一种稳健有效的去除非包膜细小病毒的技术。

　　除病毒过滤是基于粒径排阻原理，能够稳健清除各类病毒，且可进行工艺后完整性测试确保工艺的有效性，已被业界广泛接受。

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　　对于过滤器的评估和病毒清除验证，需要关注那些因素？

　　在工艺验证前的开发阶段，需要考察过滤器对于料液的处理速率、通量、收率及质量影响。在验证阶段，为考察滤器对于病毒清除的通用性和稳健性，需要选择合适的指示病毒，在去除病毒最差工艺条件下对工艺进行验证，以支持生产中可能出现的各种情形。

　　所以在选择除病毒滤器及验证前，还需要考虑下面几个方面:

　　01.考量滤器对指示病毒的截留能力

　　以下两组数据为赛多利斯Virosart® HF对MuLV与MVM 两个指示病

　　（1）MuLV 毒的截留能力体现

　　试验采用恒压过滤模式，2.0bar验证工艺压力，数据 来自不同验证机构7个不同分子，中性pH分布，每个分子平行两组试验的验证结果见图1

　　图1:不同浓度不同分子的MuLV病毒挑战LRV值

　　（2）MVM

　　同样，Virosart® HF也满足对细小病毒高截留的需求， 试验采用恒压过滤模式，2.0bar验证工艺压力，数据 来自不同验证机构10个不同分子，中性条件下pH分布, 每个分子平行的两组试验的验证结果见图2。

　　图2：10组MVM病毒挑战试验LRV值的汇总

　　02.考察相同批次内以及不同批次间滤器的 ,对病毒截留的一致性

　　在病毒挑战试验以及临床和商业生产过程中，除病毒过滤器在病毒截留能力的批次内和批次间一致性极为重要。

　　我们随机抽取了不同批次的Virosart® HF (5.0 cm2)滤器中获得的试验数据。第一组试验采用48个8个批次的滤器(每个批次6个滤器）

　　挑战样品:>108 pfu/mL PP7的20 mM KPi, pH 7.2缓 冲液，结果见图3

　　图3：8个批次每批次6个滤器在buffer条件下

　　对PP7病毒的截留能力

　　第二组试验采用48个8个批次的滤器(每个批次6个滤器）

　　挑战样品:>108 pfu/mLPP7的lg/L的IVIG (20 mM KPi, pH7.2)溶液，75%的滤速衰减，结果见图4

　　图4 8个批次每批次6个滤器在lg/L的IVIG

　　(20 mM KPi, pH 7.2)条件下75%的滤速衰减时

　　对PP7病毒的截留能力

　　两组试验说明Virosart® HF (5.0 cm2)滤器在批次内及不同批次间的病毒截留能力一致性高。

　　03.需要考察同款滤器不同膜面积型号对病毒的截留能力一致性

　　实验室小滤器通常用于研发、缩小模型和病毒验证研 究。然而，在商业生产中，需要使用更大的过滤面积的。因此，有必要确保整个系列滤器的病毒截留的病毒清除稳定性和可放大性。

　　以下试验采用不同规格的HF滤器，分别使用缓冲液和 IVIG样品进行病毒挑战。

　　挑战样品:1*108 pfu/mLPP7的20 mM KPi, pH 7.2缓 冲液和lg/LMG in KPI buffer (75%滤速衰减),结果分别见图5与图6。

　　图5：不同膜面积规格Virosart® HF滤器在buffer条件下

　　对PP7病毒的截留能力

　　图6：不同膜面积规格Virosart® HF滤器在1 g/L IVIG in KPI buffer条件下(75%滤速衰减)对PP7病毒的截留能力

　　两组试验同样说明不同膜面积规格的Virosart® HF滤器对病毒截留的一致性。

　　以上这些数据从滤器对各类指示病毒的截留能力，不同批次内及批次间的滤器病毒截留能力及不同规格的滤器的病毒截留能力出发，验证了一款除病毒滤器的对病毒截留能力的稳定性，也为病毒清除我们在正式除病毒验证前评价一款除病毒滤器验证及使用风险提供参考。

　　在正式验证实验中，病毒类型、病毒添加量、料液特性（蛋白浓度、pH/电导值、亚可见颗粒分布等）、过滤暂停等会影响过滤速度和载量。