GPComplex 甘草多糖抗非小细胞肺癌药效学研究总结报告
观察灌胃给予GPComplex甘草多糖对人源肺癌H460细胞小鼠体内移植模型的作
用，对环磷酰胺所致小鼠免疫功能低下的调节作用，从抑制肿瘤生长、提高免疫方面初步评价GPComplex甘草多糖的抗肿瘤作用，探索剂量反应关系、程度等，并大致判断其是否具有毒性、程度及剂量反应关系，为甘草多糖后续开发提供药效学依据。
人大细胞肺癌细胞H460，购自中国科学院上海生命科学研究院
甘草多糖：根据合同规定，甘草多糖的小鼠给药剂量设置低、中、高三个剂量，分别为0.25 g·kg-1、0.5 g·kg-1、1 g·kg-1。
紫龙金：临床日用量为0.65 g/片×4片/次×3次/天=7.8 g，人按60 kg计，小鼠按20 g计，按体表面积换算小鼠的临床等效剂量为1.5 g·kg-1。将紫龙金剂量设置为3 g·kg-1，为临床等效剂量的两倍。
紫龙金 索拉菲尼：临床日用量为0.2 g/片×2片/次×2次/天=0.8 g，人按60 kg计，小鼠按20 g计，按体表面积换算小鼠的临床等效剂量为0.15 g·kg-1。并根据前期该药的试验结果，将索拉菲尼剂量设置为50 mg·kg-1，为临床等效剂量的三分之一。
抗肿瘤试验：共设计6组，分别为对照组、紫龙金组、索拉菲尼组、甘草多糖低、中、高剂量组，每组7只。
调节免疫功能试验：共设计6组为，分别对照组、模型组、紫龙金组、甘草多糖低、中、高剂量组，每组10只。
甘草多糖拟临床用药途径为口服给药，因此选择灌胃给药；紫龙金及索拉菲尼均采用相似于临床用药途径的灌胃给药方式。
1. 采用人肺癌H460细胞小鼠皮下移植模型，观察GPComplex甘草多糖对肿瘤生长的抑制作用。选用Balb/c-nu雌性小鼠，接种H460肿瘤组织块，待小鼠体内接种的肿瘤生长至100mm3左右时，依肿瘤体积分为对照组、甘草多糖高剂量（1 g·kg-1）组、中剂量（0.5 g·kg-1）组、低剂量（0.25 g·kg-1）组、紫龙金（3 g·kg-1）组、索拉菲尼（50mg·kg-1）组，每组7只。分组后随即每天灌胃给药1次，对照组给予去离子水，共持续32天，于末次给药后次日取血后脱颈处死取肿瘤称重。试验期内每周2次测量肿瘤体积及动物体重。
2. 选用ICR雄性小鼠，随机分为对照组，模型组，紫龙金（3 g·kg-1）组、甘草多糖高剂量（1 g·kg-1）组、中剂量（0.5 g·kg-1）组、低剂量（0.25 g·kg-1）组，每组10只。分组后即开始每天灌胃给药1次，对照及模型组给予去离子水，共给药14天。给药第6、7天时，除对照组外，其余各组小鼠均腹腔注射环磷酰胺80mg·kg-1，第15天眼眶静脉丛取血，EDTA抗凝，用于淋巴细胞亚群分析：CD3+（T细胞）、CD3+CD4+（辅助性T细胞和迟发超敏性T细胞）、CD3+CD8+（抑制性T细胞和杀伤性T细胞）、CD3-CD19+（B细胞）、CD3-CD335+（NK细胞），统计各阳性细胞占淋巴细胞的百分比，并计算CD4/CD8的比值。
1. 人肺癌H460细胞小鼠皮下移植模型试验结果显示，与对照组比较，GPComplex甘草多糖1 g·kg-1给药32天可使抑瘤率超过30%，达30.5%，且对小鼠体重无明显影响，提示GPComplex甘草多糖具有抑制人源肺癌H460小鼠体内生长的趋势，且无明显毒副作用。
图1甘草多糖对肿瘤H460体内增殖模型的影响
2. 环磷酰胺致小鼠免疫功能低下模型试验结果显示，与正常小鼠比较，模型组小鼠给予环磷酰胺后，CD3、CD4、CD8、CD19阳性细胞比例明显下降，CD335阳性细胞比例明显升高。与模型组比较，甘草多糖1 g·kg-1给药14天明显升高CD3、CD4阳性细胞比例，降低CD335阳性细胞比例，逆转环磷酰胺的不利影响。提示GPComplex甘草多糖1 g·kg-1灌胃给药14天，具有明显促进T淋巴细胞增殖，提紫龙金高机体免疫功能的作用。
六、参考的规范和指导性文件
本研究参考CFDA（现NMPA）颁布的《细胞毒类抗肿瘤药物非临床评价的技术指导原则》（20080820颁布），同时遵循试验方案，并参考本公司制订的相关标准操作规程（SOPs）。
用，对环磷酰胺所致小鼠免疫功能低下的调节作用，从抑制肿瘤生长、提高免疫方面初步评价GPComplex甘草多糖的抗肿瘤作用，探索剂量反应关系、程度等，并大致判断其是否具有毒性、程度及剂量反应关系，为甘草多糖后续开发提供药效学依据。
人大细胞肺癌细胞H460，购自中国科学院上海生命科学研究院
甘草多糖：根据合同规定，甘草多糖的小鼠给药剂量设置低、中、高三个剂量，分别为0.25 g·kg-1、0.5 g·kg-1、1 g·kg-1。
紫龙金：临床日用量为0.65 g/片×4片/次×3次/天=7.8 g，人按60 kg计，小鼠按20 g计，按体表面积换算小鼠的临床等效剂量为1.5 g·kg-1。将紫龙金剂量设置为3 g·kg-1，为临床等效剂量的两倍。
紫龙金 索拉菲尼：临床日用量为0.2 g/片×2片/次×2次/天=0.8 g，人按60 kg计，小鼠按20 g计，按体表面积换算小鼠的临床等效剂量为0.15 g·kg-1。并根据前期该药的试验结果，将索拉菲尼剂量设置为50 mg·kg-1，为临床等效剂量的三分之一。
抗肿瘤试验：共设计6组，分别为对照组、紫龙金组、索拉菲尼组、甘草多糖低、中、高剂量组，每组7只。
调节免疫功能试验：共设计6组为，分别对照组、模型组、紫龙金组、甘草多糖低、中、高剂量组，每组10只。
甘草多糖拟临床用药途径为口服给药，因此选择灌胃给药；紫龙金及索拉菲尼均采用相似于临床用药途径的灌胃给药方式。
1. 采用人肺癌H460细胞小鼠皮下移植模型，观察GPComplex甘草多糖对肿瘤生长的抑制作用。选用Balb/c-nu雌性小鼠，接种H460肿瘤组织块，待小鼠体内接种的肿瘤生长至100mm3左右时，依肿瘤体积分为对照组、甘草多糖高剂量（1 g·kg-1）组、中剂量（0.5 g·kg-1）组、低剂量（0.25 g·kg-1）组、紫龙金（3 g·kg-1）组、索拉菲尼（50mg·kg-1）组，每组7只。分组后随即每天灌胃给药1次，对照组给予去离子水，共持续32天，于末次给药后次日取血后脱颈处死取肿瘤称重。试验期内每周2次测量肿瘤体积及动物体重。
2. 选用ICR雄性小鼠，随机分为对照组，模型组，紫龙金（3 g·kg-1）组、甘草多糖高剂量（1 g·kg-1）组、中剂量（0.5 g·kg-1）组、低剂量（0.25 g·kg-1）组，每组10只。分组后即开始每天灌胃给药1次，对照及模型组给予去离子水，共给药14天。给药第6、7天时，除对照组外，其余各组小鼠均腹腔注射环磷酰胺80mg·kg-1，第15天眼眶静脉丛取血，EDTA抗凝，用于淋巴细胞亚群分析：CD3+（T细胞）、CD3+CD4+（辅助性T细胞和迟发超敏性T细胞）、CD3+CD8+（抑制性T细胞和杀伤性T细胞）、CD3-CD19+（B细胞）、CD3-CD335+（NK细胞），统计各阳性细胞占淋巴细胞的百分比，并计算CD4/CD8的比值。
1. 人肺癌H460细胞小鼠皮下移植模型试验结果显示，与对照组比较，GPComplex甘草多糖1 g·kg-1给药32天可使抑瘤率超过30%，达30.5%，且对小鼠体重无明显影响，提示GPComplex甘草多糖具有抑制人源肺癌H460小鼠体内生长的趋势，且无明显毒副作用。
图1甘草多糖对肿瘤H460体内增殖模型的影响
2. 环磷酰胺致小鼠免疫功能低下模型试验结果显示，与正常小鼠比较，模型组小鼠给予环磷酰胺后，CD3、CD4、CD8、CD19阳性细胞比例明显下降，CD335阳性细胞比例明显升高。与模型组比较，甘草多糖1 g·kg-1给药14天明显升高CD3、CD4阳性细胞比例，降低CD335阳性细胞比例，逆转环磷酰胺的不利影响。提示GPComplex甘草多糖1 g·kg-1灌胃给药14天，具有明显促进T淋巴细胞增殖，提紫龙金高机体免疫功能的作用。
六、参考的规范和指导性文件
本研究参考CFDA（现NMPA）颁布的《细胞毒类抗肿瘤药物非临床评价的技术指导原则》（20080820颁布），同时遵循试验方案，并参考本公司制订的相关标准操作规程（SOPs）。
